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1外植体的选择
蝴蝶兰的茎尖、茎段、叶片、花梗侧芽、花梗节间、根尖等部位都已有培养成功的报道，方法各异，难度各有高低。蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，达75%；其次为花梗，成活率为62.5%；叶片和根尖最差，分别为12.5%和7.5%。针对不同外植体，取材方法也不同，通常取花梗节之间1~2cm长的幼嫩部分，切取长2~3mm的切段作为外植体。
2基本培养基的选择
蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，其中1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。
3外源激素的选择
目前常使用的外源激素主要是生长素类（如IAA、2,4-Ｄ和NAA）和细胞分裂素类（如BA、ZT、KT）。蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6-BA，较高浓度（1~8mg/L）的6-BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖，较低浓度（0.1~0.5mg/L）的6-BA则能促进原球茎分化。适宜浓度的6-BA配合较低浓度的NAA，更有利于原球茎的增殖，2.0mg/L6-BA和0.3mg/LNAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合。
4培养基添加物对蝴蝶兰增殖和分化的影响
蝴蝶兰组织培养中常加入一些天然物质如椰乳、香蕉泥、番茄汁、苹果汁等，这些物质能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，如加入100~200mg/L香蕉泥，具有较大的pH缓冲作用，有利于兰科植物的壮苗和生根。许多资料也表明，添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果。
适量的添加物对蝴蝶兰丛生芽的诱导和生根也有一定的促进作用。培养基中添加活性炭，低浓度（0.5~1.0g/L）时对原球茎增殖影响不明显，但可促进蝴蝶兰生根；高浓度（2.0~3.0g/L）时对原球茎增殖有促进作用，但原球茎有黄化现象。
蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂，对原球茎的增殖生长影响较大。蔗糖含量为2%时，原球茎分化速度最快；蔗糖含量为2%~3%时，促进芽的形成；蔗糖含量为5%时，有利于根的分化和生长。蔗糖含量为3%~5%时，抑制原球茎的分化和生长，分化质量和分化速度都显著下降。
5原球茎继代中褐化的防治
蝴蝶兰和其它兰科植物一样，原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡，不易增殖。在培养基中添加1~2g/L活性炭，适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基，能有效抑制外植体褐变死亡；培养基中加入10%椰子水，也能促进原球茎的生长，减少原球茎增殖过程中的褐变。蝴蝶兰的群体效应很明显，单芽容易褐化死亡，且增殖较慢，因此，刚诱导出的原球茎状体不能过早切割转移，在继代阶段接种时，应尽量避免切成单芽，增殖时切块也不宜过小，否则容易褐化死亡。6~8月份高温季节采芽排出的褐变物质多，成活率也最低，所以要避免在夏季采芽。
6外界条件对蝴蝶兰的影响
培养基的pH值直接影响到培养物对离子的吸收，过酸或过碱都对植物材料生长有很大影响，此外，琼脂培养基的pH还影响到凝固情况。原球茎在pH值5.0~5.4的环境中生长最好，丛生芽的诱导与增殖在pH值5.6~5.8的环境中较好。
蝴蝶兰在组织培养中，通常都以日光灯为光源，因此，可以人为地进行控制其光照强弱。光照强度对试管苗发根和生长势均有明显的影响。光照为3000lx对蝴蝶兰根诱导和植株生长有利。
在诱导蝴蝶兰丛生芽过程中，由于所取的花梗芽为花芽，在培养过程中，较低的温度影响（15~22℃）会使大部分花梗芽发育成花芽；在较高温度（23~26℃）下培养，花梗花芽转化为营养芽，所以在进行蝴蝶兰丛生芽诱导时的适宜温度条件为（25±２）℃。
7生根壮苗及移栽
生根壮苗阶段关键在于严格筛选激素的种类和浓度，一般需降低培养基的激素含量，以便形成健壮苗。常用的生长素有IBA(0.3~1.5mg/L)、NAA(0.1~0.8mg/L)。添加GA30.1mg/L+NAA0.1mg/L的组合能明显提高生根率，且植株健壮，长势好。
蝴蝶兰属热带气生兰，具气生根，栽培上要求根部通气良好。现在蝴蝶兰移栽常用基质有水苔、椰糠、蛇木、树皮等，以水苔效果较好。
